美国人的祖先是美洲原住民。美洲原住民是对南美洲和北美洲所有原住民的总称，并非单指某一个民族或种族。其中除了爱斯基摩人以外，都被统称为印第安人。

包括美国在内的北美洲原住民的祖先可能是是在大约2万年前从亚洲渡过白令海峡到达美洲的，或者是通过冰封的海峡陆桥过去的北亚居民后裔。一项化石DNA研究成果表明，现今亚洲人与美洲原住民源于共同祖先，他们生活在4万年前的中国。